5-चैनल थर्मोसाइक्लर पीसीआर रियल-टाइम QPCR पीसीआर का उपयोग

2023-07-17

Real Time Pcr

5-चैनल थर्मोसाइक्लर पीसीआर रियल-टाइम QPCR पीसीआर के उपयोग में निम्नलिखित चरण शामिल हैं:

1. नमूना तैयारी: ब्याज के जैविक नमूने से डीएनए या आरएनए निकालें। यह विभिन्न तरीकों जैसे कि फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण, कॉलम-आधारित शुद्धि, या चुंबकीय मनके-आधारित शुद्धि का उपयोग करके किया जा सकता है।
2. प्राइमर और जांच डिजाइन: डिजाइन विशिष्ट प्राइमरों और जांच जो कि ब्याज के लक्ष्य अनुक्रम से बांधेंगे। इन प्राइमरों और जांचों को आमतौर पर सॉफ्टवेयर टूल का उपयोग करके डिज़ाइन किया जाता है जो पिघलने वाले तापमान, जीसी सामग्री और विशिष्टता जैसे कारकों पर विचार करते हैं।
3. पीसीआर रिएक्शन सेटअप: डीएनए या आरएनए टेम्पलेट, प्राइमरों, जांच और अन्य आवश्यक घटकों जैसे न्यूक्लियोटाइड्स, बफर और पोलीमरेज़ के संयोजन से पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार करें। प्रतिक्रिया मिश्रण तब पीसीआर प्लेट के कुओं में वितरित किया जाता है।
4. थर्मोसाइक्लिंग: पीसीआर प्लेट को 5-चैनल थर्मोसाइक्लर में रखें, जो एक साथ कई नमूनों को समायोजित कर सकते हैं। थर्मोसाइक्लर तब लक्ष्य डीएनए या आरएनए अनुक्रम को बढ़ाने के लिए विकृतीकरण, एनीलिंग और एक्सटेंशन सहित तापमान चक्रों की एक श्रृंखला से गुजरता है।
5. वास्तविक समय की निगरानी: 5-चैनल थर्मोसाइक्लर प्रतिदीप्ति पहचान क्षमताओं से सुसज्जित है। प्रत्येक तापमान चक्र के दौरान, थर्मोसाइक्लर लेबल जांच द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति का पता लगाता है क्योंकि यह प्रवर्धित डीएनए या आरएनए से बांधता है। यह प्रवर्धन प्रक्रिया की वास्तविक समय की निगरानी के लिए अनुमति देता है।
6. डेटा विश्लेषण: वास्तविक समय प्रतिदीप्ति डेटा एकत्र किया जाता है और विशेष सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके विश्लेषण किया जाता है। सॉफ्टवेयर चक्र सीमा (सीटी) मान की गणना करता है, जो चक्र संख्या का प्रतिनिधित्व करता है जिस पर प्रतिदीप्ति संकेत एक पूर्वनिर्धारित सीमा को पार करता है। सीटी मान का उपयोग नमूने में लक्ष्य डीएनए या आरएनए की प्रारंभिक मात्रा को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
7. डेटा व्याख्या: 5-चैनल थर्मोसाइक्लर से प्राप्त सीटी मानों की तुलना विभिन्न नमूनों या प्रयोगात्मक स्थितियों के बीच की जा सकती है। यह जीन अभिव्यक्ति स्तरों की मात्रा का ठहराव, विशिष्ट उत्परिवर्तन या आनुवंशिक विविधताओं का पता लगाने, या वायरल लोड की माप, अन्य अनुप्रयोगों के लिए अनुमति देता है।
कुल मिलाकर, 5-चैनल थर्मोसाइक्लर पीसीआर रियल-टाइम QPCR पीसीआर विभिन्न आणविक जीव विज्ञान अनुप्रयोगों के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है, जो न्यूक्लिक एसिड की तेजी से और सटीक मात्रा का ठहराव प्रदान करता है।

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